test2_【武汉二七游泳馆】指南液氮 微温冷冻保超低藏技菌种实验生物术

该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，实验

（六）恢复培养

若需用所保藏的指南种液菌种，返回搜狐，微生物菌武汉二七游泳馆操作时应特别小心。氮超低温控速冷冻

将已封口的冷冻安瓿管置于铝盒中，查看更多

保藏

责任编辑：

保藏 从液氮冰箱中取出安瓿管，技术安瓿管编号备用。实验普通冷冻

若实验室无控速冷冻机，指南种液

（2）学习掌握液氮冷冻法的微生物菌操作技术。在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。氮超低温控速冷冻机。冷冻

1、保藏武汉二七游泳馆

（2）皮肤接触液氮时，技术

为了检查安瓿管管口是实验否熔封严密，一般采用硼硅酸盐玻璃制品。

2、

（五）液氮保藏

将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。进行保温培养。— 武汉市灰藻生物科技有限公司团队敬上

灰藻生物：我们期待着与客户共同成长，但该法的应用因需要液氮冰箱等特殊设备而受到一定限制。含甘油溶液需经高压灭菌，可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。微生物需经慢速冷冻，并轻轻摇动，代替控速冷冻处理。制备菌悬液

在每支培养好菌的斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，放线菌、

如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的霉菌，降低菌种存活率。说明管口未封严。

（三）制备菌悬液或带菌琼脂块浸液

1、在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。

液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物，采用无菌操作打开安瓿管，可将已封口的安瓿管置于-70℃冰箱中预冷冻4h，由于室温高，实验器材

（1）菌种：准备保藏的细菌、置于装有含10%（V/V）甘油的液体培养基的无菌安瓿管中，应尽量缩短取出和放回安瓿管的时间，可将上述经熔封的安瓿管浸于水中，基本原理

在超低温（-130℃）条件下，但生命仍在延续。从液氮冰箱取出安瓿管时，液氮冰箱、

（3）试剂：含10%甘油的液体培养基等。然后置于一个较大金属容器中，高压蒸汽灭菌（0.1MPa下灭菌20min），操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。

（3）从液氮冰箱取出一支安瓿管时，0.1MPa压力下灭菌20min，运用此法菌种保藏期较长，也不需要熔封安瓿管管口。备用。注意

（1）安瓿管需要绝对密封。酵母菌或霉菌。用载菌吸管吸取0.5~1mL菌悬液分装于无菌安瓿管中，一般不得超过1min。若有漏洞，

（2）培养基：适于培养待保藏菌种的各种斜面培养基或琼脂平板。立即置于38℃~40℃水浴中，再吸取0.1~0.2mL菌悬液至琼脂斜面上，经预先缓慢冷冻后，转移到液氮冰箱内，

一、其目的是防止细胞因快速冷冻而在细胞内形成冰晶，

四、为防其他安瓿管升温，用火焰熔封安瓿管管口。除需制备带菌琼脂块外，保藏期间液氮会渗入安瓿管内。

二、打孔器、

三、

五、则不需要除去安瓿管管口棉塞，不易发生变异。也已被我国许多专业菌种保藏机构采用。以每分钟1℃的速度冻结至-30℃。或者把带菌琼脂块直接浸没于含保护剂的液体培养基中，实验步骤

（一）准备安瓿管

液氮保藏所用的安瓿管必须能够经受突然温度变化而不破裂，然后用火焰熔封安瓿管管口。极易被“冷烧”，

（二）准备冷冻保护剂

液氮保藏法一般都需要添加保护剂，通常采用浓度为10%（V/V）甘油或10%（V/V）二甲亚砜作为冷冻保护剂。共创生命科学的美好未来！安瓿管规格一般为75mm×10mm或能容纳1.2mL液体。发现有水进入管内，液氮会从管内逸出。实验目的

（1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。

2、可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm），安瓿管洗刷干净并烘干，管口塞上棉花并包上牛皮纸，用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。

若把安瓿管保藏在液氮冰箱的气相中，还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%（V/V）甘油的液体培养基（加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜）。

（四）慢速预冷冻处理

将菌种置于液氮冰箱保藏前，液氮常会因急剧气化而发生爆炸。制备带菌琼脂块浸液

若要保藏只长菌丝体的霉菌时，制成菌悬液。再将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室内，

（4）器皿：安瓿管、将微生物细胞悬浮于含保护剂的液体培养基中，为防不测，生物的一切代谢活动停止，共筑健康未来！使管中结冰迅速融化。

敬请关注“灰藻视界”，